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大量DNA產物純化試劑盒說明書
更新時間:2015-05-20 點擊量:1404

  

                               大量DNA產物純化試劑盒說明書

 

MaxiDNA Purification Kit

 大量DNA產物純化試劑盒

 

   目錄號:  YJ0517

   保   存:  室溫

 

 

   組分說明

 

                                         Cat.No.                  YJ0517

                                         KitSize                     50

                                        BufferPB                   60ml

                                        BufferPS                   15ml

                               BufferPW(concentrate)                10ml

                                        BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDL                   50

                                CollectionTube(2ml)                 50

  產品簡介

 

      本試劑盒采用新型硅基質膜技術,通過快速簡單的結合-洗滌-洗脫步驟即可從大量的 PCR 產物或酶反   應液(酶切,連接,探針標記等)中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段,純化過程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質,從而獲得高純度,高濃度,完整性好的 DNA 片段,回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可 直接用于測序、連接和轉化、標記、體外轉錄等分子生物學實驗。

 

注意事項

 

1.  本試劑盒可無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需選擇性回收特定片段,同時去除其他不同大小片段,請選擇我公司的膠回收試劑盒(YJ0524, 加 YJ2302,YJ0518 或 YJ0526)。

 

2.  *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

 

3.  使用前請檢查BufferPB是否出現結晶或者沉淀,如有結晶或者沉淀現象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復澄清。

 

4. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關。

 

5. 所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

 

自備:無水乙醇,離心管

 

 

               操作步驟

 

    1.   估計DNA反應液的體積,加入5倍體積的Buffer PB,充分混勻(如DNA反應體系為100μl,則加 入500μlBufferPB,無需去除石蠟油或礦物油)。

 

      注意:在加入BufferPB后檢測溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30μl 的3M醋酸鈉(pH5.0),從而將pH值調到5-7。

 

    2.    柱平衡:向已裝入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDL)中加入200μl Buffer PS,     12,000rpm(~13,400×g)離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

    3.   將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

注意:吸附柱容積為700μl,若樣品體積大于700μl可分批加入 。

 

    4.   向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

 注意:如果純化的DNA用于鹽敏感實驗(例如平末端連接實驗或直接測序),建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。

   5.  12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘,以*晾干。

 

   注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(酶切、PCR等)。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

  6.   將吸附柱放到一個新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB(pH 8.5),室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

 

      注意:1)洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)。

 

   2)為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重復步驟6。

 

   3)洗脫體積不應小于50μl,體積過少會影響回收效率。

 

    4)如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續(xù)的酶促反應。

 

    5)回收大于10kb的DNA片段時,BufferEB應在50℃水浴中預熱,適當延長吸附和洗脫時間,可增加回收效率。

 

滬公網安備 31011802001677號

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